Megazyme?K-TSTA 淀粉總量檢測試劑盒

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Megazyme?K-TSTA 淀粉總量檢測試劑盒

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品牌：Megazyme

產品貨號：K-TSTA

品牌：Megazyme

產品品名：淀粉總量檢測試劑盒

英文品名：Total Starch (AA/AMG) Assay Kit

規格型號：100 assays per kit

商品說明：

淀粉總量檢測試劑盒 Total Starch (AA/AMG) Assay Kit ?使用說明：

簡介:
?????酸水解法和酶法被廣泛的應用于淀粉含量測定,酸水解法僅僅適用于純凈的淀粉樣品,應用范圍有限。酶法的前處理步驟上有各種變化，經過凝膠、液化和糊精化作用,糊精水解生成葡萄糖,最終以測量的葡萄糖計算淀粉含量。AACC方法76-11特殊之處在于：在高壓蒸汽和堿性環境下淀粉糊化成為凝膠，然后再用淀粉葡糖苷酶將淀粉轉化為葡萄糖進行測量。AACC方法76-11會低估某些樣品的淀粉含量，包括高多糖玉米淀粉和眾多的經過加工的谷物產品。今天應用的眾多的測定方法都使用了聯合處理方法,如在樣品處理過程中或直接在淀粉凝膠化后使用耐熱α-淀粉酶。對于難凝膠的樣品(如高多糖玉米淀粉)使用了氫氧化鈉或二甲基亞砜作為溶劑。為確保膳食纖維中的淀粉能夠全部溶解，Englyst和Cummings(1988)總結的處理方法中使用了去分支酶,支鏈淀粉酶。
????為了測量極端樣品得到滿意結果，兼顧數量和可靠性，Megazyme提供了一個總淀粉分析試劑盒，基于使用耐熱性淀粉酶和淀粉葡糖苷酶。這一方法已被AOAC和AACC采用?(Method?76.13)。
????最近，耐熱淀粉酶可在低pH環境下使用。因此，我們更新了我們的總淀粉測量方法加入了這種酶。這一改進的最大益處在于可以在同一pH（pH5.0）條件下進行耐熱性淀粉酶和淀粉葡糖苷酶孵育，簡化步驟以及減少麥芽酮糖（抗耐熱性淀粉酶和淀粉葡糖苷酶水解）的產生。另一改進是使用己糖激酶/葡萄糖-6-磷酸脫氫酶/?NADP+在D-葡萄糖處理步驟(K-TSHK5)。Megazyme總淀粉分析方法可以測量廣泛范圍內食品，飼料，植物和谷類產品（自然的或加工的）。對于大多數樣品（例如小麥面粉），淀粉可以在100°C抗耐熱性淀粉酶處理步驟中完全可溶。包含高水平抗性淀粉（例如高多糖含量玉米淀粉）樣品，需要先用冷2?M?KOH?或?熱DMSO進行預溶解。含可溶性淀粉和糊精的樣品，無需進行抗耐熱性淀粉酶處理。
原理:
?????抗耐熱性淀粉酶水解淀粉為可溶性分支麥芽糊精和去分支麥芽糊精。
樣品中的抗性淀粉可用2M?KOH進行預溶解，再用醋酸鈉緩沖液進行中和再進行淀粉酶水解。或者用DMSO在100°C進行溶解。
淀粉葡萄糖苷酶水解麥芽糊精至D-葡萄糖。
D-葡萄糖氧化為D-葡萄糖酸脂，釋放出(H2O2)，再用過氧化氫酶催化進行顯色反應，產生醌亞胺染料。
樣品包含高水平的D-葡萄糖和麥芽糊精可以在分析前用80%乙醇進行洗滌。單個樣品可在70分鐘內完成測定。20個樣品可在2小時內完成。
特異性，靈敏度，線性范圍和精確性
此試劑盒專用于分析a-葡聚糖（包括淀粉，糖原，植物糖原和非抗性麥芽糊精）。
最小可區分的吸收值是0.01吸收值范圍。這對應于1.0mg的D-葡萄糖（或0.9mg淀粉）/L在最大樣品體積1ml。檢測極限：2.0mgD-葡萄糖（或1.8mg淀粉）/L，這對應于0.02吸光度區別在最大體積1ml中。
此試劑盒在5-100ugD-葡萄糖范圍內呈線性。一個樣品溶液的重復測定中，吸收值會有0.005至0.010的波動。當樣品體積為1ml時，這相當于0.05-1ml/L濃度的D-葡萄糖。如果樣品在準備過程中被稀釋，結果需要乘以稀釋倍數。例如在樣品準備時，樣品稱重，如10g/L，變異范圍將在0.02至0.05g/100g。
干擾:
如果D-葡萄糖的轉化在5分鐘內完成，不會產生干擾。可以通過加入D-葡萄糖至反應完成后試管內（例如50ug在0.1ml）以檢測干擾。可以看到吸光度顯著上升。
樣品內的干擾物質可以通過加入內標進行分析。可以對這標準進行定量校正。樣品操作中的損失可以通過在起始步驟中加入D-葡萄糖進行校正。
試劑盒成分
Megazyme總淀粉含量測定試劑盒提供有足夠運行100次試驗的試劑,并提供有全部的試驗方法:
瓶1:?耐熱α-淀粉酶(10mL,?3,000U/mL在CERALPHA試劑中pH6.5;?40°C?或1600U/mL在CERALPHA試劑中pH5.0;?40°C)。穩定性>4年,?4°C保存。
瓶2:?淀粉葡糖苷酶(10mL,?3300U/mL在可溶性淀粉)（或200U/mL在p-nitrophenylβ-maltoside*，pH4.5，40°C）穩定性>4年,?4°C保存。
完整的分析程序可咨詢客服。
瓶3:?GOPOD試劑緩沖液。磷酸鉀緩沖液（0.26M，pH7.4），對羥基苯甲酸（0.22M），疊氮化鈉（0.4%W/V）穩定性>4年,?4°C保存。
?注意：
1.?如果GOPOD緩沖液存儲在-20°C，會形成鹽結晶，用雙蒸水稀釋至1L前必須完成溶解。
2.?此溶液含疊氮化鈉（0.4%W/V），有毒。
瓶4:?GOPOD試劑酶。葡萄糖氧化酶(>?12,000?U)?和過氧化物酶(>?650?U)和4-氨基安替比林（80mg）。凍干粉，穩定性>4年,?-20°C保存。
瓶5:?葡萄糖標準溶液（5ml，1mg/mL）在0.2%?W/V苯甲酸溶液中。穩定性>4年，室溫保存。
瓶6:?標準的玉米淀粉。淀粉含量見標簽。穩定性>4年,?-20°C保存。
準備試劑溶液
溶液1??用試劑1（100mM醋酸鈉緩沖液,?pH5.0，自備）稀釋1.0mL瓶1成分至30mL?。分成小份后凍存。穩定性>3年,?-20°C保存。
注意：如果按照AOAC方法996.11（example?b），用試劑4（50mM?MOPS緩沖液,pH7.0）稀釋酶。
溶液2??此酶不用稀釋可以直接使用,由于酶溶液具有一定粘稠度,所以必須使用正確的移液器。4°C下保存,穩定性>3年。
溶液3??用蒸餾水稀釋瓶3成分（GOPOD試劑緩沖液）到1L,?立即使用。
溶液4?用20ml溶液3溶解瓶4成分再倒回溶液3瓶子。鋁箔紙包裹避光。這就是????????　　葡萄糖測定試劑(GOPOD試劑)?穩定性:?4°C下保存，3個月；-20°C下保存，????????????　　12個月；
????????分裝成小份再進行凍存，只能凍融一次。
????????新鮮配制的試劑呈淺黃色或淺紫色。4°C下保存2-3個月過程中，逐漸變成深紫色。用水為空白對照時，此溶液的吸光度<0.05。
溶液5&6?同瓶5&6
自備試劑
1.醋酸鈉緩沖液(100mM,?pH5.0)?+氯化鈣(5mM)?
?????5.8ml冰醋酸(1.05g/mL)加入900mL蒸餾水,用1M(4g/100mL)NaOH調節pH到5.0,大約需要30mL。4°C下保存2個月.
?????添加0.74g二水氯化鈣完全溶解,?定容到1L,??4°C下保存>6個月。
注意：可通過添加疊氮化鈉（0.2g/L）增加此緩沖液的穩定性。室溫2年。必須在pH調完后再加入疊氮化鈉。酸化的疊氮化鈉會釋放出有毒氣體。
2.醋酸鈉緩沖液(1.2M,?pH3.8)?
?????69.6ml冰醋酸(1.05g/mL)加入800mL蒸餾水,?用4M?NaOH調節pH到3.8,?定容到1L。室溫下保存12個月。
3.氫氧化鉀溶液（2M）
加入112.2?g?KOH?至900?mL?去離子水，攪拌溶解，定容一升。儲存于密閉容器。室溫下>2年。
4.?MOPS緩沖液(50mM,pH7.0)+氯化鈣(5mM)?+疊氮化鈉(0.02%)（僅用于example?b分析樣品）
????11.55g?MOPS(鈉鹽,?Sigma?cat.?M-9381)加入900mL蒸餾水,?用1M(10%V/V)HCl調節pH到7.0,大約需要17mL。?添加二水氯化鈣(0.74g)和疊氮化鈉(0.2g),?完全溶解,?然后調整到1L,?4°C下保存6個月。
5.?醋酸鈉緩沖液(200mM,pH4.5)+疊氮化鈉(0.02%)（僅用于example?b分析樣品）
冰醋酸(11.8mL,1.05g/mL)加入900mL蒸餾水,?用1M(4g/100mL)NaOH調節pH到4.5,大約需要60mL。加入疊氮化鈉(0.2g),完全溶解,然后調整到1L,?4°C下保存6個月。
注意：可通過添加疊氮化鈉（0.2g/L）增加此緩沖液的穩定性。室溫2年。必須在pH調完后再加入疊氮化鈉。酸化的疊氮化鈉會釋放出有毒氣體。
設備:
????????????　　1.玻璃試管(圓底;16x120mm或18x150mm)
????????????　　2.離心機(3,000rpm)
????????????　　3.微量移液器(100uL).
????????????　　4.連續分配器
????????????　　5.分析天平.
????????????　　6.分光光度計510nm.
????????????　　7.漩渦混合器
????????????　　8.定時鐘
????????????　　9.沸水浴鍋和試管夾
注意事項:
1.GOPOD試劑的孵育時間沒有嚴格規定,但是至少要20分鐘,并在60分鐘內測定吸光度.
2.每次試驗必須設定試劑空白對照和葡萄糖對照(100μg,?四倍)。
????a)試劑空白對照:?0.1mL蒸餾水+3.0mLGOPOD溶液
????b)葡萄糖對照包括:0.1mL葡萄糖標準溶液(100μg/0.1mL)+3.0mLGOPOD溶液。因子F（頁碼13和14）通過D-葡萄糖在標準分析中讀得的吸光度進行計算（例如100/1.038=96.386）。
3.每次試驗必須設定標準面粉或淀粉樣品
4.每一新批此的GOPOD溶液,必須驗證其與100μg葡萄糖標準反應產生顏色所需要的最長時間,?通常為15分鐘左右。
樣品空白:
???　樣品空白按照標準試驗程序（example?A）進行,將第4步修正為添加3mL蒸餾水,第5步中也用蒸餾水替代其中的淀粉葡糖苷酶.也可以用樣品前處理中所用的酒精作為樣品空白(?example?E)。
樣品準備示例
A.不含抗性淀粉，D-葡萄糖和麥芽糊精的谷物和食物（建議的程序，pH5.0孵育）。
1.研磨谷物,?過0.5mm篩（35目）。
2.將研磨后樣品(準確稱量~100mg)加入到試管中(16x120mm),確保全部樣品位于試管底部。
3.加入0.2mL乙醇溶液(80%v/v)濕潤樣品幫助分散,?用漩渦混合器混合。
4.立即加入3mL耐熱α-淀粉酶(100mM醋酸鈉稀釋),?在沸水浴中孵育6分鐘(在孵育2分鐘,4分鐘，6分鐘的時強烈振蕩試管).
????注意:在這一步中強力震蕩是關鍵，目的是確保漿狀樣品能完全的混勻（去除塊狀）。同樣,每間隔2分鐘振蕩也是為了防止由于酒精蒸發導致某些樣品被噴出試管。如果使用聚丙烯管，增加孵育時間至12分鐘，在?4,?8和12強烈震蕩。
5.將試管放置于50°C的水浴鍋中,?加入0.1mL瓶2成分（淀粉葡糖苷酶,330U在淀粉上）。充分混合,在50°C下孵育30分鐘。
6.將全部的溶液轉移到100mL的容量瓶中,用洗瓶沖洗試管,并也倒入容量瓶中,然后用蒸餾水調整溶液體積,?充分混勻。取部分溶液離心(3,000rpm,10分鐘)。取清澈的未稀釋的上清用于分析。
?????注意：對于含有1-10%淀粉的樣品,在第6步中用蒸餾水調整溶液至10mL,充分混勻,離心(3,000rpm,10分鐘),該溶液可以直接進行第7步.對于含10-100%淀粉的樣品,用蒸餾水稀釋1.0mL樣品液到10mL再進行第7步。
7.轉移兩份稀釋的樣品溶液(0.1mL)到園底試管中(16x100mm)。
8.加入3.0mLGOPOD溶液到每一個試管中(包括葡萄糖對照和試劑空白對照),?然后在50°C下孵育20分鐘
9.葡萄糖對照包括0.1mL葡萄糖標準溶液(1mg/mL)+3.0mLGOPOD溶液。????????????　　試劑空白對照:?0.1mL蒸餾水+3.0mLGOPOD溶液
10.相對于試劑空白在510nm下測定每一個樣品和葡萄糖質控的吸光度。
B.不含抗性淀粉，D-葡萄糖和麥芽糊精的谷物和食物（AOAC?996.11）。
1.研磨谷物,?過0.5mm篩（35目）。
2.將研磨后樣品(準確稱量~100mg)加入到試管中(16x120mm),確保全部樣品位于試管底部。
3.加入0.2mL乙醇溶液(80%v/v),用漩渦混合器混合。
4.立即加入3mL耐熱α-淀粉酶(50mM?MOPS稀釋),?在沸水浴中孵育6分鐘(在孵育2分鐘,4分鐘，6分鐘的時強烈振蕩試管).
????注意:在這一步中強力震蕩是關鍵，目的是確保漿狀樣品能完全的混勻（去除塊狀）。同樣,每間隔2分鐘振蕩也是為了防止由于酒精蒸發導致某些樣品被噴出試管。如果使用聚丙烯管，增加孵育時間至12分鐘，在?4,?8和12強烈震蕩。
5.將試管放置于50°C的水浴鍋中,?加入醋酸鈉緩沖液（4ml，200mM，pH4.5），加入0.1mL瓶2成分（淀粉葡糖苷酶,?20U）。充分混合,在50°C下孵育30分鐘。
6.?按照example?A?步驟6繼續實驗。
C.含抗性淀粉，不含D-葡萄糖和麥芽糊精的谷物和食物（建議KOH溶解）
1.研磨谷物,?過0.5mm篩（35目）。
2.將研磨后樣品(準確稱量~100mg)加入到試管中(16x120mm),確保全部樣品位于試管底部。
3.加入0.2mL乙醇溶液(80%v/v),用漩渦混合器混合。
4.放入攪拌架子，加入2ml?2M?KOH至每個試管中，冰水混合浴中攪拌20分鐘左右，重懸粉末和溶解抗性淀粉。
注意：
1.不要使用渦旋儀混勻，會使淀粉乳化。
2.確保加入KOH時，試管處于劇烈震蕩狀態。這是為了避免淀粉形成團塊難以溶解。
5.當試管在磁力攪拌器上攪拌時，加入8ml?1.2M醋酸鈉緩沖液（pH3.8）至每個試管。立即加入0.1ml耐熱α-淀粉酶（瓶1）和0.1mL淀粉葡糖苷酶（瓶2），充分混合,在50°C下孵育
6.?孵育30分鐘，間斷混勻。
7.?樣品淀粉含量>10%：將全部的溶液轉移到100mL的容量瓶中,用洗瓶沖洗試管,并也倒入容量瓶中,然后用蒸餾水調整溶液體積至100ml,?充分混勻。取部分溶液離心(1800g,10分鐘)。
8.?樣品淀粉含量<10%：直接離心(1800g,10分鐘)。總體積約10.4ml（此體積可能有一定波動，特別是濕樣品用于分析時，估計體積用于計算）。
9.?按照example?A?步驟7繼續實驗。
D.含抗性淀粉，不含D-葡萄糖和麥芽糊精的谷物和食物（AOAC?996.11?DMSO溶解）
1.研磨谷物,?過0.5mm篩（35目）。
2.將研磨后樣品(準確稱量~100mg)加入到試管中(16x120mm),確保全部樣品位于試管底部。
3.加入0.2mL乙醇溶液(80%v/v),用漩渦混合器混合。
4.立即加入2ml?DMSO，渦旋混勻。沸水浴5分鐘。
5.按照example?A?步驟4繼續實驗。
E.含D-葡萄糖和麥芽糊精的谷物和食物
1.研磨谷物,?過0.5mm篩（35目）。
2.將研磨后樣品(準確稱量~100mg)加入到試管中(16x120mm),確保全部樣品位于試管底部。
3.加入5mL乙醇溶液(80%v/v)，80-85°C孵育5分鐘。渦旋混勻，再加入5ml乙醇溶液(80%v/v)。
4.離心1800g（3000rpm）10分鐘。去除上清。
5.10mL乙醇溶液(80%v/v)重懸沉淀。離心去除上清。
6.?按照example?A?步驟4繼續實驗。
若樣品含抗性淀粉，按照example?C步驟4繼續實驗。
計算:
ΔA=相對于試劑空白所讀取的吸光度
????FV=總體積（例如100ml或10ml）
0.1?=樣品分析體積
1/1000=轉化從ug至mg
100/w=淀粉作為干粉重量的比例。
W=干粉重量
162/180=D葡萄糖轉化為脫氫葡萄糖
淀粉%(占干物質比重):＝淀粉%X100/100-水分含量(%)

 

英文說明：

The Total Starch (AA/AMG) test kit is used for the measurement and analysis of total starch in cereal flours and food products. This kit now contains an improved α-amylase that allows the amylase incubations to be performed at pH 5.0 (as well as pH 7.0).

Colourimetric method for the determination of Total Starch in
cereal products, feeds, foodstuffs and other materials

Principle:
(α-amylase, 100°C ± DMSO)
(1) Starch granules + H2O → maltodextrins

(amyloglucosidase)
(2) Maltodextrins + H2O → D-glucose

(glucose oxidase)
(3) D-Glucose + H2O + O2 → D-gluconate + H2O2

(peroxidase)
(4) 2H2O2 + p-hydroxybenzoic acid + 4-aminoantipyrine →
quinoneimine + 4H2O

Kit size: 100 assays
Method: Spectrophotometric at 510 nm
Total assay time: ~ 90 min
Detection limit: 1-100% of sample weight
Application examples:
Cereal flours, food products and other materials
Method recognition:
AOAC (Method 996.11), AACC (Method 76-13.01), ICC (Standard Method
No. 168), and RACI (Standard Method)

Advantages

  • Very competitive price (cost per test)
  • All reagents stable for > 12 months after preparation
  • Simple format
  • Mega-Calc™ software tool is available from our website for hassle-free raw data processing
  • Standard included